邦菲生物率先推出ddPCR檢測服務


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邦菲生物

〖邦菲生物是北京邦菲生物科技有限公司的簡稱〗

我們的使命和理想在于推動生物新技術

我們相信新的技術會改變生物行業，甚至人類進步。

我們將關注聚焦放在最新的生物技術層面，哪怕是對儀器有著高昂成本、嚴苛的要求的實驗。如數字PCR、itraq技術、label-free技術、單分子測序技術。

我們總是可以看到這項技術所帶來的顛覆性的一面，并將它推廣到市場，變為商業化的機制。我們將生物新技術與臨床發展結合，為臨床領域提供前沿的技術支撐，為醫生提供最新的生物技術思路。

我們相信新的技術來源于這些嶄露頭角的領域，并最終帶動整個學術界的進步，我們期待為中國科研推波助瀾，并且每一天都朝著這個目標努力著。

這就是邦菲生物，幫助您，實現生物領域的飛翔之夢。

ddPCR?WorkFlow

邦菲生物可以提供的技術服務項目

不依賴于內參或標準品
期望的檢測精確度可以通過增加PCR重復數來實現
幾乎不受酶抑制劑影響
能夠分析比較復雜的混合物樣本
檢測精度及靈敏度高

相對傳統Real-time?PCR，ddPCR技術的優勢

罕見等位基因檢測
拷貝數變異檢測
基因表達絕對定量
病毒絕對定量
核酸標準品絕對定量
NGS文庫絕對定量

邦菲生物ddPCR檢測服助您引領未來

數字PCR的應用領域

數字PCR 是一個全新的絕對定量方式，整合了目前成熟發展的數字PCR 技術，帶來了前所未有的精確性和靈敏度，開啟了一場核酸定量技術的革命。在未來，數字PCR在分子診斷領域會發揮更大的作用，對于臨床診斷領域分子生物標志物的篩選及驗證發展會有巨大的促進。

▲ 拷貝數變異（Copy-number variation）

雖然生殖系或體細胞拷貝數變化是否具有臨床意義需要取決于具體臨床情況，但 CNV改變基因表達水平卻有十分重要的臨床意義。數字PCR 具有準確性和精確性的特點，這使得其可以在CNV 研究中發揮重要的作用。在有已知拷貝數的內參基因的前提下，數字PCR不但可以清晰區分一個或者兩個拷貝，更可以對多拷貝基因進行分析，例如五個或者六個拷貝。在這一點上，相比于包括qPCR 在內的常規方法，數字PCR 優勢明顯。

▲ 進入外周循環（包括血液和糞便）的腫瘤組織核酸分析

數字 PCR 的另外一個潛在的重要應用是通過檢測患者外周血樣對進入外周循環的的腫瘤組織核酸進行分析。數字PCR 技術可以直接忽略預擴增的環節直接進行準確的定量分析，相比于傳統的PCR 檢測方法，有更高的靈敏度。而且更令人鼓舞的是，有實驗證據證明，微滴式數字PCR 可以實現1:100,000 的突變頻率篩查。

▲ 突變/稀有變異檢測（Mutation/Rare variant detection）

隨著伊馬替尼（imatinib）在bcr-abl 陽性的慢性粒細胞白血病上的成功應用，越來越多的科學家將研究重點轉移至生物標記物的開發及基于特異基因的靶向治療。數字PCR已經成功的應用于腫瘤組織內的EGFR 檢測以及EGFR 突變頻率的分析。是否能夠開發出有效的靶向治療藥物，與突變基因的檢測密切相關。其中（1）攜帶藥物作用突變位點的癌細胞百分比；（2）突變的特定等位基因是否可以被準確檢測到，這兩點都直接影響到靶向治療是否有效。很顯然，在腫瘤均質細胞內檢測單一突變相對簡單，但是如果在異質組織內，在僅存有少量突變存在的情況下，如何準確檢測出突變/稀有變異，或者針對于同一種癌癥中多種亞克隆的準確鑒定，對個性化醫療的發展是一個巨大的挑戰。最近的一項研究表明，數字PCR 在進行突變/稀有變異檢測中發揮著重要的作用。使用NGS 對于肝癌的一個抑癌基因進行篩查，30 倍覆蓋全基因組篩查并沒有檢測到該基因，但76 倍覆蓋的成對外顯子篩查卻可以檢測到。后續使用傳統毛細管測序進行驗證，結果也不能確認。然而使用數字PCR 可以輕松的檢測到該突變，而且精準的確認該突變的突變頻率為13.2%。因此，對于突變等位基因的研究來說，研究平臺的靈敏度和準確性是未來的研究開發焦點所在。

▲ 藥理學（Pharmacogenetics）

有研究表明，不但體細胞變異會影響治療藥物的選擇，生殖細胞特定基因的變異對特定處方的選擇也會有直接的影響。有一些點突變或者SNP 位點可能會影響藥物代謝，還有一些情況下一些特異位點的CNV 可以預測藥物對個體的療效。在未來，通過數字PCR 技術，我們可以獲得更多關于生殖細胞CNV 對藥理學影響的實驗證據。

▲ 基因表達分析（Gene expression analysis）- 特別針對單細胞或少量細胞或者血清血漿樣品

除了常規的基因表達分析以外，數字 PCR 特別適用于單細胞或少量細胞的基因表達譜分析，這是對臨床生物標志物篩選和鑒定的很好探索。最近，有一些科學家開始著眼于非編碼RNA（non-coding RNA, ncRNA），尤其是其中的亞類-microRNAs。從原理上來講，使用數字PCR 進行microRNA 的分析更為可行，同時，在ncRNA 的篩選和鑒定領域，數字PCR 也可以與NGS 互為補充，互為印證，推動這一領域的發展。

▲ 數字PCR可以驗證二代測序(NGS)

在過去的三年內，二代測序技術飛速發展，NGS 的巨大數據信息和并行樣本處理能力可以用來進行CNV 的預測。如何在臨床領域發揮 NGS 的巨大優勢是一個重要的問題，數字PCR 是一個很好的平臺，可以與NGS 平臺獲得的數據進行相互印證。例如：使用數字PCR 檢測患者特異性標記物，與腫瘤配對末端測序實驗結果進行相互驗證，并且可以進行NGS 文庫的制備和定量。目前很難確認什么樣的 NGS 結果是臨床所需要的，通常來說NGS 篩選到的變異或異常還需要使用經典的Sanger 測序進行驗證。數字PCR 的出現，可以為NGS 發現的突變進行有效驗證提供一個非常好的實驗思路與平臺。

▲ 無創產前篩查和轉化移植檢測

在無創產前篩查領域，也已經有研究證明可以通過數字PCR 的方法可以對游離在孕婦外周血內的胎兒DNA 進行準確分析，用來檢測嬰兒的21 號染色體三體。這表明，在未來數字PCR 可能會取代NGS 實現臨床21 三體的無創篩查。在轉化移植領域，數字 PCR 也發揮著重要的作用，有數據證明，數字PCR可以在心臟移植受體患者外周血內檢測到供體特異DNA。這對移植后排異反應的跟蹤和預估提供了很好的科研證據。